СРАВНИТЕЛЬНОЕ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ МИКРОФЛОРЫ ПОЛОСТИ РТА К ПРЕПАРАТАМ КРЕЗАЦИН ДЕНТА И МЕТРОГИЛ ДЕНТА

Полный текст

Проблема эффективности лечения заболевания пародонта не теряет своей актуальности в связи с чрезвычайной распространенностью пародонтита, недостаточной культурой гигиенического ухода за полостью рта, а также с невысокой эффективностью местных противомикробных средств при лечении заболеваний пародонта [1, 2]. Общеизвестна этиология микрофлоры полости рта в развитии гингивита и пародонтита [3-5]. Поиск новых препаратов для местного лечения и профилактики заболеваний пародонта продолжается. Привлекают внимание потенциальные возможности препарата Крезацин дента - иммуностимулирующего препарата синтетического происхождения для местного применения в стоматологии. Активными веществами Крезацина дента являются: трис (2-гидроксиэтил) аммония, орто-крезоксиацетат (крезацин 3% или 5%) и метронидазол. Крезацин дента разработан в НИИ химии и технологии элементоорганических соединений в дополнение к ранее разработанному иммуномодулятору и адаптагену Трекрезан, промышленно выпускаемому в таблетированной форме. Трекрезан стимулирует выработку альфа и гамма интерферонов, влияет на иммунный статус организма за счет активации клеточного и гуморального звеньев иммунитета, стимулирует фагоцитарную активность макрофагов. Эффективность Крезацин дента изучена недостаточно, в частности, требуются микробиологические исследования по изучению влияния препарата на микрофлору полости рта. Цель исследования - изучение чувствительности ряда пародонтопатогенов и грибов рода Candida к Крезацину дента разной концентрации в сравнении с Метрогилом дента, а также к хвойному препарату Комплекс хвойный CGNC. Материал и методы В данной статье приведены результаты микробиологического исследования относительно следующих штаммов микроорганизмов: Staphylococcus aureus, Streptococcus constellatus, Candida albicans. Штаммы выделяли и культивировали в соответствии с практическими рекомендациями [6, 7]. В экспериментальной части использовали биореактор «Реверс-Спиннер RTS-1» (BioSan, Латвия). Результаты интерпретировали по изменению оптической плотности культуры микроорганизмов (OD) при длине волны λ = 850 нм. Оценка контроля роста соответствующего вида бактерий отражалась в изменении параметров оптической плотности, на основании которых была построена кривая с фазами роста микроорганизмов: адаптивная (лаг-фаза), экспоненциальная (лог-фаза), стационарная, отмирания. Изучались следующие концентрации Крезацина дента в культуральной среде: 0,5, 1,5, 3,0, 3,0 (Oil) и 5,0% (соответственно образцы под маркировкой K-1, K-2, K-3, K-4, K-5). Для сравнения взят известный комбинированный противомикробный препарат Метрогил дента, в состав которого входят два антибактериальных компонента: метронидазол и хлоргексидин (образец М-6). Кроме того, изучен хвойный препарат - 5,0% Комплекс хвойный CGNC на основе хлорофиллокаротиновой пасты. Результаты исследования По результатам культивирования референтного штамма S. aureus (см. рисунок а на вклейке) в контрольной пробирке адаптивная фаза отмечалась до 2 ч культивирования. Явных периодов развития бактериальных клеток (период первоначального роста и ускоренного развития) не наблюдается, и экспоненциальная фаза отмечена резким и интенсивным скачком оптической плотности вследствие максимальной скорости развития культуры, при которой интервалы между появлением предыдущего и последующего поколения оставались относительно постоянны. Продолжительность экспоненциальной фазы - 2-6 ч; максимальный пиковый показатель в окончании истинного логарифмического прироста - 2,54 ± 0,3 mcf (показатель α). Начиная с 6-го часа культивирования, отмечается снижение скорости бактериального прироста, в результате которого популяция перешла в отрицательное ускорение (до 14-го часа), после чего была достигнута М-концентрация - 3,33 ± 0,3 mcf (показатель β). С 14-го по 20-й час отмечается стационарное развитие культуры. В данной фазе количество вновь образовавшихся клеток равно количеству отмерших и автолизованных (разрушенных клеточными ферментами). Средний показатель оптической плотности в данной фазе - 3,23 ± 0,3 mcf. Общее время культивирования 48 ч. В образцах К-1 и К-2 отмечалось снижение скорости генерации новых популяций в период экспоненциального развития. В окончании истинного прироста клеток отмечено снижение показателя оптической плотности относительно контрольного образца, однако существенной достоверной разницы между данными образцами не отмечалось. Период отрицательного ускорения также был укорочен относительно контрольной пробирки и относительно друг к другу (К-1 - до 10 ч; К-2 - до 12 ч). М-концентрация: К-1 - 2,7 ± 0,3 mcf; К-2 - 2,67 ± 0,3 mcf. Стационарная фаза характерна для контрольного образца с суммарным средним показателем оптической плотности по двум образцам - 2,68 ± 0,3 mcf. В исследуемых образцах К-3 и К-4 отмечалось наличие периода ускоренного развития клеток (2-4 ч), что способствовало задержке наступления фазы экспоненциального развития. Логарифмическая фаза и период отрицательного ускорения по своей тенденции совпадала с характером развития клеток в контрольном образце, однако показатель β был немного ниже. Средний суммарный показатель оптической плотности для двух образцов - 2,93 ± 0,3 mcf. В образце K-5 также, как и в предыдущих образцах, отмечался период ускоренного развития, что и способствовало задержке наступления экспоненциальной фазы. Истинный логарифмический прирост в данном образце незначителен, и максимальный показатель оптической плотности в данном периоде (показатель α) - 1,39 ± 0,3 mcf (8-й час). Продолжительность периода отрицательного ускорения сопоставима с предыдущими образцами с последующим выходом культуры в стационарное равновесие. Средний показатель оптической плотности в стационарной фазе - 1,62 ± 0,3 mcf. В исследуемом образце сравнения (М-6) отмечалась существенная пролонгация начальных этапов развития бактериальных клеток (удлинение периодов первоначального роста и развития), однако по истечении экспоненциальной фазы пиковый показатель оптической плотности был достоверно выше в сравнении с образцом K-5. Сохранялась М-концентрация и при стационарном равновесии на длительном временном промежутке. Средний показатель оптической плотности в стационарной фазе - 2,11 ± 0,3 mcf. По результатам культивирования клинического изолята S. constellatus (см. рисунок б на вклейке) в контрольной пробирке адаптивная фаза продолжалась до 2-го часа культивирования. На промежутке с 2-го по 4-й час эксперимента отмечалось изменение показателя оптической плотности в связи с первоначальным развитием бактериальных клеток, а с 4-го по 6-й час - по причине логарифмического роста. Экспоненциальный скачок сопровождался резким изменением оптической плотности с последующим резким снижением скорости генерации новых популяций. Максимальный показатель оптической плотности в окончании данного периода (показатель α) - 1,68 ± 0,3 mcf (6 ч). Начиная с 7-го часа культивирования, отмечается период отрицательного ускорения, обусловленный истощением питательной среды и накоплением в культуральной жидкости токсических веществ, которые способствовали ингибированию процессов развития культуры. На 8-м часу отмечалось достижение М-концентрации (наивысшее накопление микробной массы в единице объема). Стационарная фаза характеризовалась продолжительным течением, незначительным колебанием оптической плотности со средним показателем - 1,78 ± 0,3 mcf. Общее время культивирования 48 ч. В исследуемых образцах К-1 и К-2 отмечалось пролонгирование фазы адаптации микробных клеток до 6-го часа культивирования. На промежутке 4-6 ч. выявлено наличие первоначального роста клеток, а явный период ускоренной генерации не прослеживался, тем самым культура сразу перешла в логарифмический период. Скорость генерации новых популяций в экспоненциальной фазе была сопоставима с контрольным образцом. Максимальный показатель оптической плотности в окончании лог-периода: образец К-1 - 1,84 ± 0,3 mcf (12-й час), образец К-2 - 1,28 ± 0,3 mcf (10-й час). Период отрицательного ускорения нестабильный, со скачкообразным возрастанием оптической плотности, удлинен по сравнению с контрольным образцом. Переход культуры в стационарное равновесие также был более поздним - 14-й час, продолжительностью 4 ч. Средний суммарный показатель оптической плотности для данных образцов - 1,43 ± 0,3 mcf, что на 19% ниже, чем в контрольном образце. В образцах К-3 и К-4 наблюдалась аналогичная тенденция к задержке наступления фаз развития популяции, причем как относительно контрольного образца, так и образцов К-1 и К-2. Истинный логарифмический период укорочен, и средний показатель оптической плотности в положении α - 0,98 ± 0,3 mcf (10-й час). В течение 6 ч у образца К-3 отмечается фаза отрицательного ускорения с последующим достижением М-концентрации (показатель β) на 16-й час эксперимента - 1,24 ± 0,3 mcf. Образец К-4 имел диауксийный период развития клеток (14-16-й час) с последующим резким выходом в стационарное равновесие. Средний показатель оптической плотности в стационарной фазе (для данных образцов) - 1,23 ± 0,3 mcf, что ниже на 30% в сравнении с контрольным образцом. В образце К-5 отмечалась задержка адаптивного периода до 6-го часа эксперимента. Логарифмическая фаза по-своему характеру не отличалась от контрольного образца, правда, была немного короче. После 8-го часа культивирования культура перешла в отрицательное ускорение, однако увеличение биомассы продолжалось интенсивно, что и было отмечено по показателю оптической плотности при достижении М-концентрации - 1,27 ± 0,3 mcf (12-й час). Образец М-6 также показал задержку лаг-фазы, однако скорость развития клеток в экспоненциальном периоде была почти сопоставима с контрольным образцом. Пиковый показатель оптической плотности в точке α - 1,45 ± 0,3 mcf (8-й час), что существенно выше, чем в предыдущих образцах. Стационарная фаза - продолжительная - до 22-го часа. Средний показатель оптической плотности в стационарной фазе - 1,56 ± 0,3 mcf. По результатам культивирования клинического изолята C. albicans (см. рисунок в на вклейке) адаптивная фаза в контрольной пробирке отмечалась до 4-го часа культивирования. На графике кривой роста отчетливо наблюдается период начального развития популяции - 4-9-й час. Экспоненциальное развитие клеток отмечалось скачкообразным увеличением показателя оптической плотности до 14-го часа эксперимента, с максимальным показателем оптической плотности на пике данного период - 6,08 ± 0,3 mcf. Период перед достижением показателя β (М-концентрация) был длителен, с постепенным снижением скорости генерации новых популяций. Пик данного периода отмечали спустя сутки от начала эксперимента, с показателем - 7,52 ± 0,3 mcf. Стационарная фаза средняя по продолжительности, со средним показателем оптической плотности - 7,94±0,3 mcf. Общее время культивирования - 48 ч. По результатам культивирования исследуемых образцов К-1 и К-2 отмечалась пролонгация адаптивной фазы до 8 и 10-го часа соответственно. Продолжительность и тенденция генерации новых клеток в период ускоренного развития и в лог-фазе совпадала с контрольным образцом, однако общий валовый показатель прироста был ниже и составил: для образца К-1 - 5,78 ± 0,3 mcf (18-й час), для образца К-2 - 5,73 ± 0,3 mcf (24-й час). Начало и продолжительность стационарного равновесия клеток также были укорочены, но наблюдался небольшой прирост биомассы. Средний показатель оптической плотности для двух образцов - 6,86 ± 0,3 mcf. По результатам культивирования исследуемых образцов К-3 и К-4, также, как и в предыдущих образцах прослеживалась тенденция к задержке фазы интенсивного развития (до 8-го часа). Экспоненциальная фаза была укорочена по времени относительно контроля, и пиковый показатель оптической плотности в окончании интенсивного деления клеток (для двух образцов) - 5,12±0,3 mcf (16-й час). Период отрицательного ускорения почти отсутствовал с последующим наступлением стационарной фазы. Средний показатель оптической плотности (суммарный для двух образцов) - 5,83 ± 0,3 mcf. В образце К-3 в период стационарного равновесия наблюдался линейный тип прироста клеток (до 38-го часа). В образце К-5 отмечалось небольшое удлинение адаптивной фазы, и показатели роста клеток были близки к образцам К-1 и К-2. Пик логарифмического роста отмечен на 16-й час культивирования с показателем оптической плотности 5,48 ± 0,3 mcf. Средний показатель в стационарной фазе развития - 6,32 ± 0,3 mcf. На промежутке стационарного равновесия, аналогично образцу К-3, отмечался линейный характер развития культуры. В образце М-6 тенденция развития клеток во всех периодах и фазах была аналогична контрольной пробирке. Показатели оптической плотности достоверно не отличались от контрольного образца. В пробирке с культурой S. aureus при добавлении 5,0% Комплекса хвойного CGNC отмечается пролонгация фазы адаптации до 6-го часа культивирования в сравнении с контролем. Фаза ускоренного роста прослеживается в течение последующих 2 ч, с последующим началом логарифмического роста. Экспоненциальная фаза непродолжительная и имеет пониженный показатель оптической плотности. Начиная с 10-го часа культивирования скорость генерации новых популяций в данной пробирке начала постепенно снижаться и с 12-го часа отмечается фаза замедленного роста культуры. Максимальный пиковый показатель оптической плотности в окончании логарифмического роста - 2,34 ± 0,3 Mcf. В фазе линейного роста культуры (12-22-й час) отмечается понижение скорости деления клеток, и выход в стационарный рост отмечен с показателем оптической плотности 3,2 ± 0,3 Mcf. Средний показатель в стационарной фазе - 3,18 ± 0,3 Mcf. В культуре S. Constellatus в присутствии 5,0% Комплекса хвойного CGNC отмечается пролонгация фазы адаптации до 8-го часа культивирования. Экспоненциального увеличения бактериальной популяции не наблюдается вследствие преобладания линейного роста популяций. Окончание интенсивного роста и переход в стационарную фазу отмечается с 22-го по 26-й час эксперимента. Средний показатель оптической плотности для образца 2,38 ± 0,3 Mcf. В культуре C. albicans при добавлении 5,0% Комплекса хвойного CGNC адаптивная фаза и фаза ускоренного роста не отличались от предыдущих образцов. Логарифмический рост характеризуется падением скорости бактериального прироста пикового значения оптической плотности 2,9 ± 0,3 Mcf (20-й час). Средний показатель оптической плотности в стационарной фазе - 3,1 ± 0,3 Mcf. Заключение Гель Метрогил дента практически не оказывает влияния на культуру клинического изолята C. albicans, поскольку показатель оптической плотности культуры в присутствии Метрогила дента не отличается от контрольного, в то время как Крезацин дента в концентрации 0,5 и 1,5% подавляет рост C. albicans в на 13,6%, а в более выраженных концентрациях - до 26,6%. Относительно S. aureus Метрогил дента снижает оптическую плотность культуры указанного пародонтопатогена на 34,7%, Крезацин дента - на 49,8% в концентрации 5,0%. Constellatus снижал свою концентрацию в присутствии Метрогила дента на 12,4%, тогда как в присутствии Крезацина дента - на 30,9%, начиная с концентрации 3%. Комплекс хвойный CGNC характеризуется большим влиянием на C. Albicans. Таким образом, можно констатировать более выраженное антимикробное действие Крезацина дента в сравнении с Метрогилом дента, а также антигрибковое действие Комплекса хвойного CGNC.

Об авторах

И. С Лашко

Академия постдипломного образования ФГБУ ФНКЦ ФМБА России

125371, г. Москва

В. Н Царев

Московский государственный медико-стоматологический университет им. А.И. Евдокимова

127473, г. Москва

Е. Е Олесов

Академия постдипломного образования ФГБУ ФНКЦ ФМБА России

125371, г. Москва

М. З Миргазизов

Академия постдипломного образования ФГБУ ФНКЦ ФМБА России

125371, г. Москва

Е. В Глазкова

Академия постдипломного образования ФГБУ ФНКЦ ФМБА России

125371, г. Москва

Валентина Николаевна Олесова

Академия постдипломного образования ФГБУ ФНКЦ ФМБА России

Email: olesova@implantat.ru
д-р мед. наук, профессор 125371, г. Москва

Список литературы

Дополнительные файлы