Mycotic flora characteristics of the endontic flora in patients affected by COVID-19

Full Text

ОБОСНОВАНИЕ

Всемирная организация здравоохранения 5 мая 2023 года объявила, что COVID-19 больше не является мировой чрезвычайной угрозой в области здравоохранения и чрезвычайная фаза эпидемии завершилась. Несмотря на это, многие люди продолжают страдать от «постковидного синдрома», а также обострения хронических заболеваний, спровоцированного вирусом или приёмом медикаментов на этапе лечения. Так или иначе все эти факторы вызывают дисбаланс иммунной системы человека [1, 2].

В настоящее время на стоматологическом приёме можно наблюдать широкий спектр последствий, возникших на фоне перенесённой ранее новой коронавирусной инфекции. Среди них выявлены различные поражения слизистой оболочки полости рта, такие как простой герпес, кандидозный стоматит, географический язык, геморрагические и некротические изъязвления, петехии и пустулёзная энантема [3–5, 7]. Наблюдаются также частое обострение очагов хронических заболеваний пульпы и периодонта зуба, возникновение острых форм пульпита, быстрая прогрессия деструкции твёрдых тканей зубов и заболевания пародонта [1–3]. У стоматологических пациентов помимо вышеперечисленного наблюдается неудовлетворительная гигиена полости рта, которую можно рассматривать как отягчающее состояние. До сих пор неясно, являются ли эти проявления прямым результатом вирусной инфекции, следствием системного ухудшения здоровья или побочными реакциями на лечение [2].

Не следует игнорировать потенциальное влияние ранее рассмотренных факторов на изменение активности микрофлоры (микробиоты) полости рта. Видовой состав микрофлоры чрезвычайно разнообразен, она представляет собой благоприятную среду для осуществления жизнедеятельности многих видов аэробных, облигатных и факультативно-анаэробных микроорганизмов [5–7]. Вызванный SARS-CoV-2 или иной причиной дисбаланс иммунной системы пациента обусловливает активную жизнедеятельность микроорганизмов, в норме не вызывающих тех или иных патологических изменений, но являющихся компонентами микробиоты полости рта: Porphyromonas gingivalis, Treponema denticola, Prevotella intermedia, Peptostreptococcus micros, Fusobacterium spp., Staphylococcus spp., Pseudomonas spp., Candida spp. и др. В последнее время резко возрос интерес к проблеме кандидоза у ранее переболевших COVID-19 пациентов. Кандидоз является наиболее распространённым грибковым заболеванием; а наиболее частым его возбудителем служит Candida albicans [4, 6, 7].

Согласно полученным данным в проведённых нами ранее исследованиях [5, 7], у обследуемых пациентов выявлены такие заболевания эндодонта, как хронический гангренозный пульпит (59%), обострение хронического периодонтита (18%), острый гнойный периодонтит (23%). В экосистеме корневых каналов базируются разные вирулентные виды бактерий, являющиеся трудно- или некультивируемыми микроорганизмами. Согласно нашим исследованиям, при микроскопии 117 препаратов пульпы зубов и содержимого корневых каналов, взятых у пациентов, ранее перенёсших COVID-19, в 98 случаях (83,8%) выявлены элементы дрожжеподобных грибов Candida [5, 7]. Скорее всего, подобная картина может являться следствием перенесённой ранее новой коронавирусной инфекции, на фоне которой произошёл дисбаланс иммунной системы, что отмечают многие исследователи [8]. Активизация деятельности условно-патогенных микроорганизмов, которые в норме не проявляют себя в полости рта, даёт начало развитию различных патологий, в частности пульпы и периодонта, которые у пациентов, в разные сроки переболевших COVID-19, протекают нетипично. Рассмотрена целесообразность и необходимость включения для данной категории пациентов помимо стандартного стоматологического осмотра ещё и дополнительных методов обследования (бактериоскопическое и бактериологическое исследование) перед началом эндодонтического лечения. В таких клинических случаях врач-стоматолог сможет подобрать наиболее оптимальный метод лечения, делая акцент на устранение определённого вида микроорганизма, и тем самым предотвратить возникновение отдалённых осложнений после эндодонтического лечения зуба [5, 7].

Цель исследования — выявить особенности микотической флоры эндодонта у пациентов, ранее перенёсших COVID-19.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

В наших предыдущих исследованиях [5, 7] с помощью метода бактериоскопии был провёден анализ содержимого корневых каналов зубов у пациентов, переболевших COVID-19.

В ходе настоящей работы выполняли бактериологическое исследование у 49 пациентов, ранее переболевших в разные сроки COVID-19, с диагнозами «обострение хронического периодонтита», «хронический гангренозный пульпит», «острый гнойный периодонтит» с целью выявления грибов рода Candida в системе корневых каналов зуба. Предварительно пациентов разделили на группы в соответствии с окончательным диагнозом, который был поставлен на основании данных стандартного клинического исследования и результатов дополнительных методов исследования (электроодонтометрии, рентгенологической диагностики, температурной пробы). В первую группу с диагнозом «хронический гангренозный пульпит» вошли 27 пациентов (55,1%). Во вторую группу с диагнозом «острый гнойный периодонтит» вошли 9 пациентов (18,37%). Третью группу с диагнозом «обострение хронического периодонтита» составили 13 пациентов (26,53%).

Забор содержимого корневого канала проводили стерильным эндодонтическим инструментом. Массу тонким слоем распределяли на поверхности предметного стекла, высушивали, окрашивали 1% водным раствором гематоксилина и эозина в течение 15–30 с, смывали проточной водой, высушивали и осматривали с помощью микроскопа под увеличением. Определяли количество в поле зрения элементов грибов и кокковой флоры: единичные элементы, единичные скопления, много в поле зрения и сплошь покрывающие все поле зрения.

Материалом для бактериологического исследования послужило содержимое корневого канала, которое брали во время механической обработки каналов стерильным эндодонтическим инструментом. Далее собранный материал помещали в пробирку с транспортной средой Amies (COPAN, Италия). Эта транспортная среда представляет собой модификацию базовой транспортной среды Стюарта, которая способна до 3 дней поддерживать микроорганизмы, такие как Neisseria spp., Haemophius spp., Corynebacteria, Streptococci, Enterobacteriaceae и др., в том числе и Candida, однако с целью получения наилучшего результата рекомендовано осуществлять посев в течение первых 24 ч.

Далее материал транспортировали в лабораторию с целью посева на питательную среду. Посев проводили в стерильных чашках Петри на плотную среду — глюкозопептонный агар Сабуро — путём втирания пластмассовым шпателем. Чашки Петри помещали в термостат на 24–48 ч инкубации при температуре 37±1° С. Далее исследование выполняли по общепринятой схеме: полученные культуры идентифицировали до вида по характеру роста на плотной среде.

Состав среды Сабуро представлен ферментированным пептоном, глюкозой, казеином, агаром. Благодаря высокой концентрации глюкозы как компонента и низкому уровню pH данная питательная среда проявляет селективные свойства по отношению к грибам. Кроме того, там присутствует теллурит калия, который окрашивает колонии Candida albicans в чёрный цвет вместо привычного белого.

Принцип бактериологического метода исследования — визуальное обнаружение бактерий, выросших на питательной среде при посеве исследуемых образцов.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Успех лечения пульпита и периодонтита во многом зависит от эффективности воздействия на микробный и грибковый фактор. Основным критерием успешного эндодонтического лечения является тщательная механическая и медикаментозная обработка кариозной полости и системы корневых каналов, предусматривающая полное устранение бактерий, грибов и их токсинов.

Основываясь на полученных данных ранее проведённых нами исследований [5, 7], у пациентов, переболевших COVID-19, при бактериоскопии препаратов пульпы зуба в 83,8% случаев выявлено наличие дрожжеподобных грибов рода Candida и во всех случаях — наличие кокковой флоры. Бактериоскопия в качестве метода диагностики была выбрана как самая простая и доступная для обнаружения грибковых элементов в патологическом материале.

Приводим пример бактериоскопического исследования у пациента В., 47 лет, переболевшего COVID-19 менее года назад (на момент стоматологического приёма), в препарате которого были обнаружены элементы гриба рода Candida. Пациенту был поставлен диагноз «хронический гангренозный пульпит зуба 4.6». Представлены рентгенологический прицельный снимок зуба 4.6 (рис. 1) и фотография бактериоскопического исследования содержимого корневых каналов (рис. 2).

 

Рис. 1. Прицельный рентгенологический снимок зуба 4.6.

Fig. 1. X-ray of tooth 4.6.

 

Рис. 2. Бактериоскопическое исследование содержимого канала зуба 4.6. Обнаружены грибы рода Candida.

Fig. 2. Bacterioscopy of the contents of the tooth canals 4.6. Fungi of the genus Candida were detected.

 

С целью выявления вида гриба проводили бактериологическое исследование содержимого корневых каналов у 49 пациентов, которое не только подтвердило данные бактериоскопии, но и конкретизировало ранее полученные результаты.

Первое наблюдение выполняли через 48 ч, а на 5-й день окончательно характеризовали полученные культуры.

В первой группе с диагнозом «хронический гангренозный пульпит» (n=27) уже при первом наблюдении на плотной среде Сабуро в 21 из 27 случаев (77,8%) получены гладкие выпуклые колонии чёрного цвета с ровным краем в виде полусферы и приблизительным диаметром 1,0–2,0 мм (рис. 3). При окончательном исследовании чёрные колонии Candida albicans наблюдались в 100% случаев.

 

Рис. 3. Колонии Candida albicans на среде Сабуро.

Fig. 3. Colonies of Candida albicans on Sabouraud agar.

 

Во второй группе с диагнозом «острый гнойный периодонтит» (n=9) при первом наблюдении во всех случаях (100%) имели место колонии дрожжеподобных грибов Candida albicans. На 5-й день наблюдений колонии приобрели более выпуклый вид.

В третьей группе с диагнозом «обострение хронического периодонтита» из 13 случаев при первом наблюдении колонии Candida albicans в обширном количестве наблюдались у 11 пациентов (84,6%). В 2 случаях (15,4%) роста колоний не наблюдалось.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

При помощи бактериологического исследования в содержимом корневых каналов зубов у пациентов, ранее переболевших в разные сроки COVID-19, обнаружены грибы рода Candida. Бактериологический анализ позволил подтвердить данные бактериоскопии и определить, что колонии, культивируемы в чашке Петри, принадлежат Candida albicans. Чёрные колонии Candida albicans наблюдались в 95,92% случаев, за исключением 2 случаев (4,08%) отрицательного результата, возможной причиной которого может служить как нарушение хранения и сбора материала, так и нарушение режима инкубации.

Несмотря на широкое разнообразие методик эндодонтического лечения и препаратов для воздействия на представителей микрофлоры корневых каналов, у пациентов, переболевших COVID-19, часто наблюдаются сложности на этапах эндодонтического лечения с последующим возникновением осложнений, которые могут быть связаны с активностью неуточнённой микрофлоры корневых каналов. Исследование показало, что при лечении пациентов, ранее переболевших COVID-19, целесообразно учитывать высокий риск инфицирования тканей периодонтального комплекса грибами рода Candida. Это требует дополнительных методов исследования содержимого корневых каналов, чтобы избежать развития нежелательных стоматологических симптомов на этапах лечения осложнённых форм кариеса зубов.

ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ ИНФОРМАЦИЯ

Источник финансирования. Авторы заявляют об отсутствии внешнего финансирования при проведении исследования.

Конфликт интересов. Авторы декларируют отсутствие явных и потенциальных конфликтов интересов, связанных с проведённым исследованием и публикацией настоящей статьи.

Вклад авторов. Все авторы подтверждают соответствие своего авторства международным критериям ICMJE (все авторы внесли существенный вклад в разработку концепции, проведение исследования и подготовку статьи, прочли и одобрили финальную версию перед публикацией).

Наибольший вклад распределён следующим образом: Э.Г. Борисова — замысел и дизайн исследования, подготовка статьи и её критический пересмотр в части значимого интеллектуального содержания; А.Л. Ермолович — сбор и анализ данных, написание текста; Д.Д. Семёнова — сбор и анализ данных, написание текста.

ADDITIONAL INFORMATION

Funding source. This study was not supported by any external sources of funding.

Competing interests. The authors declare that they have no competing interests.

Authors’ contribution. All authors made a substantial contribution to the conception of the work, acquisition, analysis, interpretation of data for the work, drafting and revising the work, final approval of the version to be published and agree to be accountable for all aspects of the work. E.G. Borisova — significant contribution to the conception and design of the study, preparation of the article and its critical revision in terms of significant intellectual content; A.L. Ermolovich — data collection and analysis, text writing; D.D. Semenova — data collection and analysis, text writing.

About the authors

Anna L. Ermolovich

Military Medical Academy named after S.M. Kirov

Author for correspondence.
Email: anya.ermolovich@mail.ru
ORCID iD: 0000-0001-5885-0559
SPIN-code: 8073-3050
Russian Federation, Saint Petersburg

Eleonora G. Borisova

Military Medical Academy named after S.M. Kirov

Email: pobedaest@mail.ru
ORCID iD: 0000-0003-2288-9456
SPIN-code: 3918-3090

MD, Dr. Sci. (Medicine), Professor

Russian Federation, Saint Petersburg

Dar’ja D. Semenova

Military Medical Academy named after S.M. Kirov

Email: malyshewa.dasha@mail.ru
ORCID iD: 0000-0003-1467-3321
SPIN-code: 7676-7360

MD, Cand. Sci. (Medicine)

Russian Federation, Saint Petersburg

References

Supplementary files